原文作者– Helen Whitby, PhD

翻譯作者- Kevin Zhao, M.S., MBA

緩沖溶液是指由弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）所組成的緩沖對(duì)配制的，且能夠在加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)，可以有效減緩pH值改變的水溶液。緩沖溶液能幫助維持分析方法的穩(wěn)定，而不會(huì)因?yàn)槲⑷醯沫h(huán)境改變的情況下而造成分析結(jié)果的改變。

緩沖溶液是被用來維持pH值的穩(wěn)定。它們是通過維持弱酸及其共軛堿的平衡從而防止了pH值的改變。

當(dāng)配制緩沖溶液時(shí)

你應(yīng)該遵循以下幾個(gè)原則

HPLC緩沖液通常用于控制在液相色譜分析中所不希望出現(xiàn)的二次相互作用。此外，緩沖液也被用來工作分析物的電離狀態(tài)，以確保分析物不會(huì)同時(shí)出現(xiàn)一個(gè)以上的電離狀態(tài)。

化合物的pKa值代表此化合物的50%離子化和50%中性時(shí)的pH值。如果在此pH值下分析此化合物，你會(huì)看到分裂峰的出現(xiàn)或者不穩(wěn)定的保留時(shí)間。因此，我們建議所有的分析方法的pH值都應(yīng)該控制在目標(biāo)分析化合物的pKa值正負(fù)兩個(gè)pH單位以上。

當(dāng)配制等度流動(dòng)相的時(shí)候，我們

還需要考慮以下幾個(gè)因素來確保方法的穩(wěn)定

以下的這個(gè)實(shí)驗(yàn)例子展示了當(dāng)流動(dòng)相

用以下不同的方式來混合時(shí)，

峰保留時(shí)間可能出現(xiàn)的改變

緩沖液的濃度也是很重要的。我們一般認(rèn)為，10mM以下的濃度不足夠提供可以控制化合物硅醇活性或者電離狀態(tài)所需要的緩沖能力，因此10mM是反相或者HILIC色譜模式下的最低有效濃度。對(duì)于其他色譜模式，如體積排阻色譜就需要更高的緩沖液濃度，使用超過100mM濃度的緩沖液在體積排阻色譜法中并不罕見。

緩沖液的濃度必須非常精確地平衡好，以確保在所有的條件下都能達(dá)到完全溶解。在反相條件下，如果方法條件是包含了高比例有機(jī)相的話（例如跨度很大的梯度），則很有可能需要控制緩沖液的濃度，以確保不會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽的析出。

當(dāng)開發(fā)一個(gè)可靠穩(wěn)定的HPLC方法時(shí)，流動(dòng)相的貢獻(xiàn)跟色譜柱固定相的選擇性一樣重要，另外流動(dòng)相的選擇與配制跟色譜柱固定相批次間的質(zhì)檢也是一樣重要的。